Законодательство СССР




Поиск документов на сайте

Утверждены 

Министерством здравоохранения СССР 

29 июля 1991 г. N 6193-91 

 

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ 

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИТУСА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ 

И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ 

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. 

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. 

 

1. Краткое описание препарата 

 

Химическое название: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-[(3-этилсульфонилпиридин-2-ил)сульфонил]мочевина. 

 

OCH 

___N N___/ 3 

// \\---SO NH-C-NH--// \\ 

\ ___ / 2 \\ \ ___ / 

--- \ O N --- \ 

SO C H OCH 

2 2 5 3 

 

Общепринятые названия: титус, ДРХ-Е9636. 

Эмпирическая формула: C H N O S . 

14 17 5 7 2 

Молекулярная масса: 431,4. 

Химически чистый титус представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 176 - 178 °C. В виде сухой пленки на стекле и в растворе в ацетонитриле относительно устойчив; в кислой (pH < 3) и щелочной среде (pH > 9) быстро гидролизуется. Период полураспада в водной среде при pH 5 - 4,6 дня; pH 7 - 7,2 дня; pH 9 - 0,3 дня, в почве - от 1,7 до 4,3 дня. 

Хорошо растворим в ацетонитриле, метиленхлориде и хлороформе. Растворимость в дистиллированной воде: при 25 °C < 10 мг/л, в буферном растворе при pH 7 - 7,3 г/л. 

Титус малотоксичен для человека и теплокровных животных (СД 

50 

для крыс > 5000 мг/кг), не обладает побочными токсическими 

эффектами, может вызвать слабое раздражение слизистой оболочки 

глаз. 

Титус - новый повсходовый гербицид, эффективный в борьбе со злаковыми однолетними и многолетними сорняками в посевах кукурузы и посадках картофеля. Зарегистрирован в России как средство борьбы со злаковыми сорняками, особенно гумаем ползучим, в посевах кукурузы в виде 75-процентной сухой текучей суспензии с нормой расхода 40 - 50 г/га. 

 

2. Методика определения титуса в зеленой массе и зерне 

кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 

 

2.1. Основные положения 

 

2.1.1. Принцип метода 

Методика основана на определении остатков титуса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием фотокондуктивного детектора и колонки с силикагелем. Определение проводят после экстракции гербицида буферной смесью и реэкстракции метиленхлоридом. 

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. 

2.1.2. Избирательность метода 

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании кукурузы: 2,4-Д, симазин, атразин, эрадикан. 

2.1.3. Метрологическая характеристика метода 

 

Таблица 1 

 

TT 

¦Анализируемый¦ n ¦ Метрологические параметры, P = 0,95 ¦ 

¦ объект ¦ +TTTT+ 

¦ ¦ ¦предел ¦ диапазон ¦ среднее ¦ стандартное ¦доверитель-¦ 

¦ ¦ ¦обнару-¦определяемых ¦ значение ¦отклонение S,¦ный ¦ 

¦ ¦ ¦жения, ¦концентраций,¦определения,¦ % ¦интервал ¦ 

¦ ¦ ¦мг/кг ¦ мг/кг ¦ % ¦ ¦среднего ¦ 

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦результата,¦ 

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦% ¦ 

++++++++ 

¦Зеленая масса¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦растений ¦15 ¦0,05 ¦0,05 - 1,0 ¦89,0 ¦7,48 ¦+/- 4,1 ¦ 

¦Зерно ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦кукурузы ¦15 ¦0,05 ¦0,05 - 1,0 ¦86,5 ¦6,40 ¦+/- 3,5 ¦ 

L++++++ 

 

2.2. Реактивы и материалы 

 

Титус с содержанием действующего вещества 99,5% фирмы Дюпон. 

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-82. 

Вода бидистиллят, ГОСТ 7602-72. 

Калий фосфорнокислый двузамещенный. 

Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75. 

Кислота ортофосфорная, ГОСТ 6552-80. 

Метилен хлористый для хроматографии, ГОСТ 12794-80. 

Натрий сернокислый безводный, хч, ГОСТ 4166-76. 

Спирт изопропиловый, ГОСТ 9805-84. 

Спирт метиловый для хроматографии, ТУ 6-09-1709-77. 

Циклогексан для хроматографии, ТУ 6-09-1832-77. 

Приготовление растворов: 

а) 1 - молярный раствор K HPO : 174 г фосфорнокислого 

2 4 

двузамещенного калия помещают в мерную колбу объемом 1000 мл, 

добавляют дистиллированной воды до полного растворения соли и 

доводят объем водой до метки; 

б) фосфатный буфер (pH 7,0): смешивают 150 мл 1 М K HPO с 

2 4 

1350 мл дистиллированной воды. Доводят pH смеси до 7,0, добавляя 

по каплям концентрированную ортофосфорную кислоту и контролируя pH 

среды с помощью универсального иономера; 

в) экстрагирующая смесь: готовят смесь метанола с фосфатным буфером в соотношении 75:25 по объему; 

г) подвижная фаза для ВЭЖХ: циклогексан - 750 мл, изопропанол - 125 мл, метанол - 125 мл, смесь уксусной кислоты с водой (9:1) - 1 мл; 

д) состав для кондиционирования колонки: изопропанол - 400 мл, уксусная кислота ледяная - 100 мл, вода бидистиллят - 10 мл. 

Приборы, аппаратура, посуда 

Жидкостный хроматограф "Уотерс", модель 510, с фотокондуктивным детектором "Тракор", модель 965, или другой аналогичного типа. 

Колонка стальная длиной 30 см с сорбентом на основе силикагеля с удельной поверхностью 300 кв. м/г и размером частиц 10 мкм марки мю-Порасил фирмы Уотерс или Силасорб-300 фирмы Хемапол. 

Мельница лабораторная. 

Гомогенизатор лабораторный со стаканом емкостью 100 - 150 мл. 

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичного типа. 

Водоструйный насос, ГОСТ 25336-82. 

Иономер универсальный ЭВ-74. 

Воронки конические, стеклянные, ГОСТ 25336-82. 

Воронки делительные на 500 мл, ГОСТ 25336-82. 

Концентраторы грушевидные КТУ-100-14/19 НШ-19, ГОСТ 25336-82. 

Воронки Бюхнера фарфоровые диаметром 70 мм, ГОСТ 9147-80. 

Колбы Бунзена объемом 800 мл, ГОСТ 25336-82. 

Пипетки мерные на 2,0; 1,0; 5,0; 10,0; 25 мл, ГОСТ 20292-74. 

Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74. 

Вата стеклянная для хроматографии. 

Фильтры диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм фирмы Милипор. 

 

2.3. Отбор проб 

 

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в сухом, хорошо вентилируемом помещении. Перед анализом пробы размалывают на лабораторной мельнице до размеров частиц менее 1 мм. 

Пробы зеленой массы замораживают и хранят в холодильнике при температуре ниже -15 °C. 

 

2.4. Подготовка к определению 

 

2.4.1. Кондиционирование хроматографической колонки 

Перед началом работы хроматографа раствор для кондиционирования колонки и подвижную фазу дегазируют в течение 2-х часов, пропуская через растворы гелий. Операцию повторяют ежедневно в течение 1 часа перед началом анализа, не выключал прибора. При добавлении новой порции растворителей дегазирование проводят в течение 2-х часов. 

Готовую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при 35 °C, пропуская через нее в течение 4-х часов раствор для кондиционирования колонки со скоростью 0,5 мл и затем еще 4 часа подвижную фазу для ВЭЖХ с той же скоростью. Эту операцию проводят ежедневно перед началом ввода проб в ночное время с использованием таймеров (реле времени). Нарушение данного режима приводит к резкой потере чувствительности. 

2.4.2. Приготовление стандартных растворов 

Стандартный раствор N 1 с концентрацией титуса 1 мг/мл готовят следующим образом: взвешивают 50 мг титуса с точностью +/- 0,0002 г, переносят навеску в мерную колбу на 50 мл ацетонитрилом и доводят объем раствора до метки этим же растворителем. Методом последовательного разбавления в ацетонитриле готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике не более 1 месяца. 

Для калибровки хроматографа ежедневно готовят рабочие стандартные растворы с концентрацией титуса 0,1; 0,2; 0,4; 0,6 мкг/мл, внося пипеткой соответствующее количество раствора N 2 в мерные колбы, упаривая ацетонитрил досуха током азота и доводя объем раствора до метки подвижной фазой без уксусной кислоты. 

Хроматографируют по 20 мкл каждого рабочего раствора, измеряют высоту пика (или площадь) и строят график зависимости высоты (площади) пика от концентрации титуса. 

 

2.5. Описание определения 

 

2.5.1. Экстракция и очистка экстракта 

Навеску измельченного зерна или зеленой массы - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой, приливают 100 мл экстрагирующей смеси и гомогенизируют в течение 1 мин. при скорости 1500 об./мин. Банки с гомогенатом устанавливают на встряхиватель, закрывают плотно крышками и встряхивают 10 мин. По истечении срока банки переносят в центрифугу с охлаждением и центрифугируют 10 мин. при скорости 3500 - 4500 об./мин. Экстракт осторожно переносят в воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом в колбу Бунзена. Экстракцию повторяют, добавляя в банку 50 мл ацетонитрила, встряхивая 10 мин., центрифугируя и отфильтровывая. Объединенный экстракт переносят из колбы Бунзена в чистую пластиковую банку объемом 250 мл, обмывая колбу экстрагирующей смесью. К экстракту приливают 50 мл метиленхлорида, банку плотно закрывают крышкой и интенсивно встряхивают смесь в течение 10 мин. Затем экстракт центрифугируют 10 мин. при 3500 - 4500 об./мин. Содержимое банки осторожно (по стеклянной палочке) переносят в делительную воронку и нижний слой (метиленхлорид) сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Повторяют экстракцию еще 2 раза порциями метиленхлорида по 50 мл с последующим центрифугированием. Объединенные экстракты упаривают досуха на ротационном испарителе при t = 40 °C. 

Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы, не содержащей уксусной кислоты, и вводят в хроматограф 20 мкл раствора. 

2.5.2. Условия хроматографирования 

Жидкостный хроматограф "Уотерс", модель 510, с программатором температуры и фотокондуктивным детектором "Трактор", модель 365. 

Показания аттенуатора - 1 x 50. 

Скорость движения ленты самописца - 120 мм/час. 

Колонка стальная длиной 30 см, внутренний диаметр 3 мм. Неподвижная фаза - мю-Порасил, Уотерс. 

Температура колонки - 35 °C. 

Скорость потока подвижной фазы - 0,3 мл/мин. 

Объем пробы, вводимой в колонку, - 20 мкл. 

Абсолютное время удерживания титуса - 27 мин. 29 сек. 

Линейность детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг. 

Каждую анализируемую пробу вводят 2 раза и вычисляют среднюю высоту (площадь) пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор 1,0 мкг/мл, разбавляют. 

2.5.3. Обработка результатов анализов 

Содержание титуса рассчитывают методом соотношения со стандартом по формуле: 

 

П x A x V 

пр 

X = -----------, 

П x p 

с 

 

где: 

X - содержание гербицидов в пробе, мг/кг; 

П - высота (площадь) пика стандарта, мм; 

с 

П - высота (площадь) пика образца, мл; 

пр 

A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл; 

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, 

мл; 

p - масса анализируемого образца, г. 

 

3. Требования техники безопасности 

 

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами. 

 

Таблица 2 

 

ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТУСА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ 

(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ) 

 

TTT 

¦ Среда ¦Добавлено титуса,¦Обнаружено, мг/кг¦Полнота определения,¦ 

¦ ¦ мг/кг ¦ ¦ % ¦ 

+++++ 

¦Зеленая масса ¦0,5 ¦0,469 ¦93,8 ¦ 

¦ ¦0,1 ¦0,00833 ¦83,3 ¦ 

¦ ¦0,05 ¦0,045 ¦90,0 ¦ 

¦Зерно кукурузы ¦0,5 ¦0,418 ¦83,5 ¦ 

¦ ¦0,1 ¦0,0859 ¦85,9 ¦ 

¦ ¦0,05 ¦0,045 ¦90,0 ¦ 

L+++ 

 

 

 

Форум
Открылся форум WorkLib.ru