Законодательство СССР




Поиск документов на сайте

Утверждены 

Министерством здравоохранения СССР 

29 июля 1991 г. N 6106-91 

 

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ 

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И 

РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. 

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. 

 

1. Краткая характеристика 

 

Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК). 

 

¦ - + 

CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH C H N O P. 

3 2 2 ¦ 4 5 15 2 4 

\\ NH 

O 2 М.м. 198,19. 

 

Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C. 

Растворим в воде, нерастворим в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л. 

Гербицид для борьбы с широким спектром одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве. 

 

2. Методика определения глуфосината аммония (баста) в воде 

и растительных культурах <*> 

 

-------------------------------- 

<*> Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта. 

 

2.1. Основные положения 

 

2.1.1. Принцип метода 

Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на пластинках "Силуфол" с обнаружением басты по реакции с нингидрином. 

2.1.2. Метрологическая характеристика метода 

Минимально детектируемое количество - 0,1 мкг. 

Нижний предел определения: 

вода - 0,025 мг/л 

растения: 

овощи, фрукты - 0,1 мг/кг 

зерно - 0,2 мг/кг 

зеленая масса (травянистая растительность, хвоя) - 0,5 мг/кг 

Размах варьирования, %: 

вода - 70 - 102 

растения - 66 - 105 

Среднее значение определения, %: 

вода - 87 

растения - 83 

Стандартное отклонение, %: 

вода - 5,6 

растения - 6,4 

Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5: 

вода +/- 15,6 

растения +/- 18 

Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2 - 3 мл, равен 1,2. 

2.1.3. Избирательность метода 

Определению не мешают другие ФОП, в том числе водорастворимые, глифосат фосфамид. Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже (п. 2.5.1). 

 

2.2. Реактивы и растворы 

 

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79. 

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78. 

Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86. 

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77. 

Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79. 

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-81. 

Этанол 96%, ГОСТ 5962-81. 

Медь сернокислая, чда, ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета. 

Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-77. 

Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74. 

Вата обезжиренная (промытая эфиром). 

Бинт или марля. 

Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%. 

Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев. 

Рабочие стандартные растворы 1 - 100, 2 - 10 мкг/мл, 3 - 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака. 

Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель. 

Проявляющий реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке. 

 

2.3. Приборы и посуда 

 

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83. 

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-74. 

Вакуумный водоструйный насос. 

Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82. 

Воронка Бюхнера, d = 75 мм, ГОСТ 9147-80. 

Электроплитка с закрытой спиралью. 

Холодильник бытовой с морозильной камерой. 

Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ 25336-82. 

Колбы мерные, 100, 50 мл, ГОСТ 1770-74. 

Цилиндры мерные,50,100 мл, ГОСТ 1770-74. 

Пробирки мерные, 10 мл, ГОСТ 1770-74. 

Выпарительные чашки 40 - 50 мл, ГОСТ 9147-80. 

Колонки хроматографические, альфа = 18 мм, высота 20 см. 

Пипетки на 1 - 10 мл, ГОСТ 1770-74. 

Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или шприц на 1 мл. 

 

2.4. Отбор проб 

 

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79. 

 

2.5. Проведение определения 

 

2.5.1. Экстракция глуфосината аммония из воды и растений 

Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу 

емкостью 500 мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю, 

помещают ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>. 

Вращают колбу на ротационном испарителе (без включения вакуума), 

чтобы вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию 

проводят до тех пор, пока в колбе не останется ~= 20 мл воды. 

Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 - 100 мл и 

продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2 

- 3 мл. Быстро сливают воду в мерную пробирку (V ). Либо 

оставшуюся воду (~= 20 мл) сливают в выпарительную чашку и 

упаривают на кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно! 

Не выпаривать досуха, чашку периодически ополаскивают водой, 

оставшейся в чашке.) Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку. 

Измеряют объем (V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл 

этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, 

дают отстояться и аликвоту 0,1 - 0,3 мл наносят на 

хроматографическую пластинку. 

-------------------------------- 

<*> Примечание: приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать в дальнейшем. 

 

Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5 - 1 см, зерно до 2 - 3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты - 100 г, трава - 20 г, зерно - 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты - 150 мл, траву, зерно - 100 мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты - 80 - 90 мл, зерно, трава - 60 - 70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты - 75 мл (соответствует массе "P" - 50 г), трава, зерно - 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой) отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100 - 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 - 3 мл, как описано для воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже. 

Одновременно с анализируемым образцом подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца. 

Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом. 

Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба, наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить ацетон. Затем насос отключают. 

К подготовленному, как описано выше, экстракту (2 - 3 мл) 

прибавляют 50 мл ацетона и хорошо перемешивают. Пропускают 

полученный ацетоновый раствор через колонку под вакуумом 

водоструйного насоса, промывают колонку 20 мл ацетона (под 

вакуумом), затем 20 мл смеси ацетон - вода 9:1 (под вакуумом) и 

весь элюат отбрасывают. Колбу отключают от вакуума, пропускают 

через колонку 15 мл воды при прокапывании без отсоса. Когда над 

слоем сорбента останется ~ 0,5 см воды, подключают колбу с 

колонкой к водоструйному насосу. Сливают элюат из колбы в мерную 

пробирку и измеряют точно объем - V - (должно быть ~ 10 мл). 

Отбирают 1 мл экстракта, прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл 

(1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают 

отстояться и аликвоту 0,1 - 0,2 мл анализируют методом ТСХ. 

Примечание: можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2 - 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4 - 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже. 

 

Одновременно готовят элюат контрольного образца. Из полученного контрольного элюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см. п. 2.1.3), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого образца. 

2.5.2. Тонкослойная хроматография 

Пластинку "Силуфол" размером 15 x 15 см делят на 5 полосок 

шириной 3 см. С нижнего края пластинки, на расстоянии 1,5 см от 

края, по центру каждой полосы наносят микропипеткой (шприцом) или 

пипеточным дозатором по 0,2 мл контрольного элюата, элюата с 

внесенным глуфосинатом аммония, элюата исследуемого образца, 0,2 

мл рабочего стандартного раствора 3, что соответствует 0,2 мкг, и 

0,1 мл рабочего стандартного раствора 2, что соответствует 1 мкг. 

Пластинку при нанесении проб и стандартов для более быстрого 

испарения воды можно подогревать на электрогрелке. Когда вода 

испарится, пластинку помещают в хроматографическую камеру, в 

которую налита смесь метанол - аммиак (7:3). Дают растворителю 

подняться на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры. 

Помещают ее под УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20 

см от источника света. После облучения опрыскивают пластинку 

проявляющим реагентом и помещают на 1 мин. в сушильный шкаф при 

температуре 40 °C. Затем вынимают из шкафа и оставляют при 

комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного 

света). Через 5 - 7 минут проявляются сиренево-красного цвета 

пятна глуфосината аммония с R 0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт, 

внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца). 

Сразу после проявления стандартов проводится оценка содержания 

пестицида в исследуемом образце. 

Примечание: при увеличении температуры и времени прогрева, а 

также при более длительном хранении (уже после проявления 

стандартов) в некоторых образцах проявляются коэкстрактивные 

вещества с R 0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/- 0,05. 

 

2.6. Обработка результатов анализа 

 

Количественное определение проводится путем визуального 

сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и пятен 

стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно 

стандарта, содержащего 0,2 мкг, и пятно, где 0,2 мкг внесено в 

пробу. Наиболее точно (ошибка +/- 11%) количественная оценка 

достигается при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем содержании 

баста в исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный 

объем V = 10 мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в 

п. 2.5.2. 

Расчет результатов содержания баста в образце проводят по 

следующей формуле: 

 

A x V x B x K 

X = --------------, 

V x P 

 

где: 

X - содержание баста в образце, мг/кг; 

A - содержание баста, найденное в образце на пластинке, мкг; 

V - общий объем водного элюата, мл; 

B - кратность разведения V ; 

V - объем этанольного экстракта, нанесенного на пластинку, 

мл; 

P - масса анализируемой пробы, мл или г (для растений с учетом 

взятой аликвоты соответствует 1/2 навески); 

K - коэффициент, учитывающий потери при концентрировании 

вымораживанием до объема 2 - 3 мл, равен 1,2. 

 

3. Техника безопасности 

 

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами. 

 

 

 

Форум
Открылся форум WorkLib.ru