Законодательство СССР




Поиск документов на сайте

Утверждены 

Министерством здравоохранения СССР 

29 июля 1991 г. N 6132-91 

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ 

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ (ЭТИЛФОСФИТА АЛЮМИНИЯ И ФОСФОРИСТОЙ 

КИСЛОТЫ) В РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ, ПРОДУКТАХ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, 

ВОДЕ, ПОЧВЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде. 

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками. 

 

1. Краткая характеристика препарата 

 

Эфаль - смесевой препарат; 

(I) трис-О-(этилортофосфит)алюминия 

 

O М.м. 345,0. 

¦¦ 

(C H O_PO_) Al C H AlO P . 

2 5 ¦ 3 6 18 9 3 

 

(II) фосфит алюминия 

 

AlPO М.м. 106,0; 

 

(III) фосфористая кислота 

 

H PO М.м. 82,02. 

3 3 

 

Эфаль - 66,6% к.э. - вязкая прозрачная жидкость, хорошо растворима в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II - трудно растворимы; в органических растворителях - практически не растворимы. 

МДУ эфаля в растительных культурах (огурцы, виноград) - 0,5 мг/кг, ПДК в воде - 0,3 мг/л. 

 

2. Методика определения эфаля (этилфосфита алюминия 

и фосфористой кислоты) в растительных культурах, 

продуктах их переработки, воде, почве методом 

газожидкостной хроматографии 

 

2.1. Основные положения 

 

2.1.1. Принцип метода 

Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде метилпроизводных. 

2.1.2. Метрологическая характеристика метода 

Метрологическая характеристика метода определения этилфосфита алюминия в растительных культурах, вине, виноградном соке, воде, почве приведена в таблице. 

 

Таблица 

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФАЛЯ 

(ЭТИЛФОСФИТА АЛЮМИНИЯ И ФОСФОРИСТОЙ КИСЛОТЫ) В РАСТИТЕЛЬНЫХ 

КУЛЬТУРАХ, ПРОДУКТАХ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, ВОДЕ, ПОЧВЕ 

 

TT 

¦Исследуемое¦ Исследуемый ¦ Метод ГЖХ ¦ 

¦ соединение¦ объект +TTT+ 

¦ ¦ ¦ предел ¦ среднее ¦стандартное¦доверительный¦ 

¦ ¦ ¦обнаружения,¦ значение ¦отклонение,¦ интервал ¦ 

¦ ¦ ¦мг/кг, мг/л ¦определения,¦ % ¦ среднего, % ¦ 

¦ ¦ ¦ ¦ % ¦ ¦ ¦ 

+++++++ 

¦Этилфосфит ¦вода <1> ¦0,01 ¦82 ¦8,5 ¦10,4 ¦ 

¦алюминия ¦почва <1> ¦0,1 ¦74 ¦7,1 ¦9,6 ¦ 

¦ ¦растительные ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦культуры: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦огурцы, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦виноград <1> ¦0,1 ¦75 ¦8,4 ¦11,2 ¦ 

¦ ¦хмель <2> ¦0,4 ¦75 ¦7,0 ¦6,5 ¦ 

¦ ¦вино <1> ¦0,2 - 0,5 ¦78 ¦6,8 ¦8,7 ¦ 

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦Фосфористая¦вода <1> ¦0,01 ¦79 ¦5,9 ¦7,5 ¦ 

¦кислота ¦почва <1> ¦0,1 ¦75 ¦7,7 ¦10,3 ¦ 

¦ ¦растительные ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦культуры: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦огурцы, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 

¦ ¦виноград <1> ¦0,1 ¦77 ¦9,9 ¦12,8 ¦ 

¦ ¦вино <1> ¦0,2 - 0,5 ¦76 ¦7,1 ¦9,3 ¦ 

L+++++ 

 

-------------------------------- 

<1> ВНИИГИНТОКС. 

<2> НИПТИХ. 

 

2.1.3. Избирательность метода 

Условия экстракции и последующего газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов других групп. 

 

2.2. Реактивы и материалы 

 

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-82. 

Метилгликоль (метилцеллозольв) чда, МРТ 6-09-6347-69. 

Гидразингидрат чда (или паратолилсульфометилнитрозамид чда). 

Кали едкое ч, ГОСТ 9285-78. 

Хлороформ хч, ГОСТ 20015-74. 

Кислота уксусная (ледяная) осч, ГОСТ 18270-81. 

Кислота серная хч, ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор. 

Триэтиламин, МРТУ 6-09-6347-63. 

Метанол хч, ГОСТ 6995-77. 

Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6262-79. 

Азот в баллоне особой чистоты, ГОСТ 9293-74. 

Водород в баллоне, ГОСТ 3022-80. 

Воздух из баллона, ГОСТ 9-010-80, или нагнетаемый компрессором. 

Неподвижная фаза - 15% карбовакс 20М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм). 

Этилфосфит алюминия хч. 

Фосфористая кислота хч. 

Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней. Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой. Хранить не более 2 дней. 

 

2.3. Приборы, аппаратура и посуда 

 

Газовый хроматограф серии "Цвет" или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД) или пламенно-ионизационным (ПИД). 

Колонки стеклянные длиной 1 м и 2 м, диаметр 3,5 мм. 

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76. 

Колбы грушевидные (круглодонные) вместимостью 500 мл, 250 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14, ГОСТ 25336-82. 

Колбы мерные вместимостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74. 

Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 1770-74. 

Колбы конические вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82. 

Пипетки на 0,1; 0,2; 1,0; 5,0; 10,0 мл, ГОСТ 1770-74. 

Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ 5Е-2.833.0.24. 

Прибор для получения диазометана (рис. 1 - не приводится): 

- колба круглодонная трехгорлая, ГОСТ 25336-82, емкостью 500 мл на шлифах, ГОСТ 9737-70 (реакционный сосуд); 

- холодильник Либиха на шлифах; 

- делительная воронка на шлифе (капельница); 

- П-образный переходник на шлифах; 

- капилляр. 

 

2.4. Подготовка и определение 

 

2.4.1. Отбор проб 

Отбор, хранение и доставка проб производятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79 от 21.08.79. 

2.4.2. Подготовка колонки для ГЖХ 

Колонку заполняют стандартной фазой (15% карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (50 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100° до 150°. Затем колонку присоединяют к детектору. 

 

2.5. Описание определения 

 

2.5.1. Экстракция 

Вода <1>. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную 

колбу емкостью 500 мл и упаривают в вакууме водоструйного насоса 

(вакуум 10 - 30 мм рт. ст., температура бани 45 °C) до 40 - 50 

мл. Оставшуюся воду переносят в колбу для отгонки емкостью 100 мл 

и упаривают при тех же условиях на 2 - 4 мл. Переносят в мерную 

пробирку, измеряют объем (V) и отбирают аликвоту 0,1 мл (V ) для 

метилирования и дальнейшего ГЖХ-анализа. 

В случае если используемый водоструйный насос не дает 

соответствующего вакуума, можно основную часть пробы 

сконцентрировать замораживанием. Колбу емкостью 500 мл, содержащую 

200 мл воды, присоединяют к ротационному испарителю и помещают ее 

в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>. Вращают 

колбу на ротационном испарителе (без подключения вакуума), чтобы 

вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию проводят до 

тех пор, пока в колбе останется 40 - 50 мл воды. Оставшуюся воду 

переносят в отгонную колбу емкостью 100 мл и концентрируют на 

ротационном испарителе под вакуумом до 2 - 4 мл при нагреве бани 

не более 45 °C. Переносят остаток в мерную пробирку, измеряют 

объем (V ) и отбирают аликвоту (0,1 мл) на газохроматографический 

анализ. 

-------------------------------- 

<*> Примечание: Приготовленную смесь лед с солью можно 

повторно замораживать и использовать ее многократно. 

 

Растительные продукты: 

Овощи, фрукты <1>. Из измельченного образца исследуемого 

продукта отбирают на анализ 100 г, заливают 100 мл воды, 

подкисленной предварительно уксусной кислотой до pH = 5, и 

экстрагируют 30 мин. на аппарате для встряхивания. Фильтруют в 

мерный цилиндр через фильтр "красная лента" (желательно под 

вакуумом) 50 мл пробы (соответствует P = 25 г пробы). Переносят 

экстракт в колбу для отгонки и отгоняют воду под вакуумом при 

температуре бани не более 45 °C до 2 - 2,5 мл. Измеряют точно 

объем сконцентрированной пробы (V ), отбирают 0,2 мл, переносят в 

мерную пробирку и доводят до 2 мл смесью растворителей 

метилгликоль - ацетонитрил (1:1). Полученную смесь либо переносят 

в центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об./мин. в 

течение 15 минут, после чего отбирают в градуированную пробирку 

для дальнейшего метилирования 1 мл центрифугата, либо фильтруют 

через небольшой бумажный фильтр "красная лента" и также отбирают в 

градуированную пробирку для метилирования точно 1 мл смеси, что 

соответствует аликвоте 0,1 мл (V ) сконцентрированного (V ) 

2 1 

экстракта. 

Хмель <2>. Из измельченного образца отбирают на анализ 25 г. 

Препарат из образца экстрагируют смесью растворителей метилгликоль 

и ацетонитрил (1:1) трижды по 50 мл, каждый раз встряхивая колбу 

по 10 минут на аппарате для встряхивания, давая пробе немного 

отстояться. Экстракт сливают через безводный сульфат натрия в 

колбочку для отгонки растворителя. Отгонку ведут под вакуумом 10 - 

15 мм рт. ст. при температуре бани не более 40 °C. Растворитель 

отгоняют до небольшого объема. Затем собирают раствор 

количественно в мерную колбу емкостью 50 (V ) мл и доливают до 

метки ацетонитрилом. Из раствора отбирают 5 (V ) мл для 

метилирования и дальнейшего газохроматографического определения. 

Вино, виноградный сок. Этим способом может быть проведен анализ эфаля в спелом винограде. 100 г винограда гомогенизируют в миксере, переносят пробу в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 - 5 мин. при 3000 об./мин. Сок отделяют от мякоти декантацией и измеряют объем (100 г ягод дают 70 - 80 мл сока) <*>. 

-------------------------------- 

<*> Конечный объем при упаривании зависит от сорта вина, сока. При упаривании крепленых вин, сладких соков до 2 мл может образоваться остаток в виде карамели, поэтому их упаривают до объема 5 мл. 

 

Вариант 1 <1> - 10 мл вина, виноградного сока упаривают под 

вакуумом (10 - 30 мм рт. ст.) водоструйного насоса (температура 

бани не более 45 °C) до 2 - 5 мл <*>. Измеряют точно объем 

сконцентрированной пробы (V ), отбирают 0,2 мл и далее поступают, 

как описано при анализе овощей и фруктов. 

-------------------------------- 

<*> Конечный объем при упаривании зависит от сорта вина, сока. 

При упаривании крепленых вин, сладких соков до 2 мл может 

образоваться остаток в виде карамели, поэтому их упаривают до 

объема 5 мл. 

 

Вариант 2 <3> - 25 мл вина или виноградного сока вливают в 

круглодонную колбу на 250 мл, добавляют 100 мл метилгликоля и 1 мл 

триэтиламина. Смесь упаривают на ротационном испарителе при 

температуре 40 °C и давлении 20 мм рт. ст. до объема 25 мл. Этот 

раствор количественно переносят в мерную колбу на 50 мл (V ) и 

доводят до метки ацетонитрилом. Содержимое колбы перемешивают и 

фильтруют через бумажный фильтр для удаления нерастворимых 

веществ. Из фильтрата отбирают 5 (V ) мл для метилирования. 

Почва <1>. К 100 г воздушно-сухой почвы приливают 70 мл хлороформа и 70 мл воды. Встряхивают пробу на аппарате для встряхивания 30 минут. Дают 15 минут отстояться. Сливают жидкую фазу, фильтруя под вакуумом на воронке Бюхнера через фильтр "красная лента". К остатку в колбе прибавляют 50 мл хлороформа и 30 мл воды, энергично встряхивают и фильтруют, как описано выше. Фильтрат переносят в делительную воронку и отбрасывают нижний хлороформный слой. Водную фазу переносят в колбу для отгонки и концентрируют до 10 мл под вакуумом водоструйного насоса, как описано выше для растений. Измеряют точно объем сконцентрированной пробы, отбирают 0,2 мл и далее поступают, как описано при анализе овощей и фруктов. 

2.5.2. Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) 

Подготовленные аликвоты экстрактов (V ) метилируют 

диазометаном. Одновременно метилируют стандартные растворы 

этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут по 0,1 

мл рабочих стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и 

по 0,9 мл смеси растворителей метилгликоль - ацетонитрил (1:1), 

т.е. подготовленные к метилированию и дальнейшему 

газохроматографическому анализу стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5 

мкг/мл, 0,2 мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты. 

2.5.2.1. Получение диазометана 

Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки. 

Вариант I <1>, <2>. В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают 6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за 1 - 2 с. 

Вариант II <3>. В реакционную колбу (см. рис. 1) вводится 10 г паратолилсульфометилнитрозамида, 25 мл 4% KOH в метаноле и 100 мл этилового эфира. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. 

2.5.2.2. В подготовленные к метилированию пробы и стандарты 

вводят по 5 - 6 мкл ледяной уксусной, 3 - 5 мкл 20-процентной 

серной кислоты и продувают получаемый в описанном выше приборе 

диазометан до появления интенсивной желтой окраски раствора пробы 

или стандарта. Затем медленно нейтрализуют избыток диазометана в 

пробе (стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной 

кислоты до исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к 

газохроматографическому определению. Замеряют конечный объем 

пробы, мл (V ). В хроматограф вводят 1 - 3 мкл полученного 

раствора. 

После окончания метилирования прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа (вариант I), отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой. 

2.5.3. Хроматографический анализ 

Газовый хроматограф серии "Цвет" с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД) * или пламенно-ионизационным (ПИД) **. 

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм * (или 1 м **). 

Неподвижная фаза - 15% карбовакс 20М на хроматроне N-AW-DMCS <*> (или SP-1000 на хромосорбе **). 

Температура колонки 145 °C * (или 125 **). 

Температура испарителя 180 °C * (или 250 **). 

Газ-носитель - азот с расходом 50 мл/мин. * (или гелий 55 мл/мин. **). 

Расход воздуха 120 мл/мин. <1> (400 мл/мин.). 

Расход водорода 65 мл/мин. * (или 20 мл/мин. **). 

Вводимый объем 1 - 3 мкл * (0,5 мкл **). 

-9 

Шкала множителя 2 x 64 x 10 . 

Скорость диаграммной ленты 240 мм/час. 

При условиях *: 

Время удерживания: 

Диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1 мин. 

Метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита алюминия): 2,6 мин. (хроматограмма приведена на рис. 2 - не приводится). 

Предел определения: 

Диметилфосфоната - 0,1 нг 

Метилэтилфосфоната - 0,1 нг 

При условиях **: 

Время удерживания диметилфосфоната 1,1 мин. 

Предел определения диметилфосфоната 0,5 мкг. 

Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартами этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты по высоте пиков. 

Расчет результатов анализа проводят по формуле: 

 

C x H x V x V 

2 1 3 

X = ----------------, 

H x V x V x P 

1 2 4 

 

где: 

X - содержание этилфосфита алюминия (фосфористой кислоты) в 

анализируемой пробе, мг/кг, мг/л; 

C - количество стандарта этилфосфита или фосфористой кислоты, 

введенных в хроматограф, в нг; 

H - высота пика стандартного раствора, мм; 

H - высота пика пробы, мм; 

V - конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл; 

V - объем пробы (мл), отобранной для метилирования из пробы 

V ; 

V - объем пробы после метилирования, мл; 

V - объем пробы, введенной в хроматограф, мкл; 

P - масса анализируемой пробы или объем анализированной пробы 

воды, мл. 

 

3. Техника безопасности 

 

Соблюдать все необходимые требования при работе в химических лабораториях, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений систем МЗ СССР N 2455-81 от 20.10.81. 

Особое внимание обратить при работе с гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования безопасности, описанные в методике. 

Гидразингидрат - токсичная, пожароопасная жидкость (температура воспламенения 59 °C, самовоспламенения - 267 °C). 

 

 

 

Форум
Открылся форум WorkLib.ru